DENGUE:
Visión del Laboratorio



              Mariela van der Wekken
                 Serologia - HIGA
Epidemiología
   Principales problemas de Salud pública en todo el
    mundo.
   80 millones infectados anualmente, 20 mil mueren.

Enfermedades producidas por Flavivirus
→”Infecciones ReEmergentes”

   Expansión del Vector y la diseminación del Virus
    dengue y su forma grave: DH/SCHD.
El Virus DENGUE
   RNA, simple cadena 11 Kb.

   3 proteínas estructurales y 7 proteínas no
    estructurales.

   Familia Flaviviridae, Genero Flavivirus.

   4 Serotipos: DEN-1, DEN-2, DEN-3 y DEN-4.

   Dengue Clásico vs Dengue Hemorrágico

    (DH) / Síndrome de Choque por Dengue
    (SCHD).
Síntomas
•   Fiebre acompañado de:
       Dolor de cabeza y retro ocular
       Perdida de apetito
       Nauseas, vómitos
       Dolores musculares y articulares
       Erupción de piel

•   DH: manifestaciones hemorrágicas.
        ↑permeabilidad vascular .
•   SCHD: Hipotensión,
          ↓circulación periférica (piel fría),
Transmisión
   Hembras de Aedes aegypti.

   Persona   Insecto   Persona.

   Mayor actividad durante el día.

   Combatir Mosquitos, Larvas y Huevos.

   Ciclo en condiciones óptimas; 10 días.
Ciclo de vida del Dengue
http://www.youtube.com/watch?
v=UVxvtZ0Er9Y&feature=player_detailpage
Patogenia
    Periodo de Incubación: 7-10 días.

     Replicación viral: máxima 2-3 días antes de los
    síntomas y desaparece al 5 día.

    Inmunidad a un Serotipo y de “Larga duración”

    2 Rtas. Serológicas:
      *PRIMARIA: No inmunes a Flavivirus
      *SECUNDARIA: Ya tuvieron contacto con
                       Flavivirus.
Datos a tener en cuenta
   Síntomas.
   Viaje a áreas de brote autóctono.
   Hepatograma alterado.
   Leucopenia y Plaquetopenia.
   Vacuna Fiebre amarilla.
   Si tubo alguna vez Dengue.
   Manifestaciones hemorrágicas.
Tratamiento
    No existe Tratamiento especifico.
    No existe Vacuna efectiva.
    No dar Aspirina!!.
    Aumento de Líquidos, dieta normal.
    Reposo absoluto, Aislamiento con mosquiteros.
    Las complicaciones DH/SCHD aparecen al 3-5 día
    cuando ya desapareció la fiebre.
Prevención
Huevos, y larvas pueden vivir en colecciones
pequeñas de agua.

   Huevos son muy resistentes.

   Evitar elementos que contengan agua.

   Uso de Repelentes, Mosquiteros

   Uso Manga Larga, pantalones largos.
Van der wekken mariela  dengue
Situación Epidemiológica Argentina
   Erradica Vector década ’60.
    Reinfestacion 1986 en NE y primer epidemia en
    1998 en Salta por serotipo 2.
    2006-2008 casos autóctonos en Corrientes,
    Formosa, y Salta. Serotipos 1,2 y 3.
    2009 miles de casos(+) NO y NE. Casos
    autóctonos Pcia. Buenos aires.
    Enero-4Abril 2009 INEVH por RT-PCR solo DEN-
    1.
DIAGNOSTICO POR EL
   LABORATORIO

    DENGUE
“La elección del Método de Diagnostico a emplear,
 depende de los días de evolución de los síntomas:



 Periodo Agudo          Periodo Convalecencia

     1 a 4 días                5 a 21 días

Búsqueda del Virus            Búsqueda de
                              Anticuerpos


Métodos Directos         Métodos Serológicos
Métodos Serológicos



Se basan en la búsqueda
 de los anticuerpos.



 Luego del 5° día.
    “Los Flavivirus pueden dar reacción cruzada en las
    serologias haciendo mas difícil el diagnostico”


Rta. Serológica en la Infección Aguda:
→ PRIMARIA: SIN contacto con Flavivirus
              Acs. Principal/ IgM.
→ SECUNDARIA: contacto con Flavivirus.
                  Acs. Predomina IgG
                 Rta. Inmune mas importante.
Van der wekken mariela  dengue
A) Inhibición de la Hemaglutinación (IH)




•    Principio: Virus dengue aglutina GR de ganso, que se
    puede I(-) con la presencia de acs anti-Dengue.

•    Ventajas: confiable / equipo mínimo.

•    Desventajas: Laboriosa / 2 muestras de suero
                  Rx. Cruzadas / mayor tiempo.
B) Neutralización (NT)

•   Ventajas: * Sensible / Especifica.
              * Única que permite diferenciar Serotipo.

•   Desventajas: * 2 muestras pareadas.
                * tiempo. No apto para rutina
                * Determina Acs. Totales.
C) ELISA de captura IgM (MAC-ELISA)


•   Principio: Captura de anticuerpos IgM del suero utilizando
     anti-IgM humanas U a la fase sólida.


•   Ventajas: Rápido / Sencillo.
           Rx. Cruzadas / Especificidad.
           Poco volumen de suero / Económico.
           Incluye los 4 serotipos: Sensibilidad.
D) ELISA IgG


•   Desventajas: Sueros pareados
                 Rx. Cruzada con otros Flavivirus.



      E) Test Diagnostico Rápido (RDT)




        F) ELISA para IgA
Métodos Directos


  Se basan en la búsqueda
   del antígeno o virus.



  Antes del 5° día.
A) Aislamiento Viral

•   Ventajas: Especifico
              Método de Referencia.

    A.1) Inoculación Intratoracica de Mosquitos

    A.2) Inoculación Células de mamíferos.

    A.3) Inoculación en células de Mosquitos.
B) Detección de Ac. Nucleicos (RT-PCR)

•   Ventajas: Mas fácil y rápido que el Aislamiento
              Viral.
              Especifico de Serotipo.

•   Puede usarse DOT-BLOT con sondas radioactivas

      C) Detección de Ag Viral (Inmunohistoq)

•   Ventajas: Mas fácil y rápido que el Aislamiento
              Viral.
Toma de muestra
y Envío.


  Con la muestra
    adjuntar la
 “Ficha Epidemiológica”
Suero     Mantener a 4° por 48 hs.
          Mantener a -20° por mas de 72 hs


           Muestra 1 a -70°.
Tejidos    Muestra 2 a T°amb. Fijado en
                     formol o parafina.


           Mantener a 4° por 48 hs.
LCR        Mantener a -20° por mas de 72 hs
Algoritmo de Redes
Laboratorio para dengue
Contexto epidemiológico actual. Argentina.




                             Circular Marzo 2009
Manejo en Áreas epidémicas y
No Epidémicas


    “Para un adecuado uso
  de los Recursos, se plantea
  ésta Metodología de
  trabajo”.
Áreas de Epidemia
   la Confirmación por Laboratorio de cada caso sospechoso
     significa “un mal uso de recursos”.

     cuadro    +  Nexo                       CASO DENGUE
    compatible   Epidemiol.

   Solo se estudiarán un pequeño n° de esos casos, para
     analizar:
    duración del brote, vigilar nuevos serotipos, todos los casos fatales,

    etc.
Áreas no Endémicas


 El trabajo del Laboratorio se centra en la vigilancia e
  identificación de nuevas zonas hacia donde se propaga la
  enfermedad.

                     Se estudiara cada caso sospechoso.
3              Htal. “San Juan de
                      LAB.Referencia        Dios. La Plata.
                        Provincial
                                           Htal. “Evita Pueblo”
                      (Serologia ELISA        Berazategui.
                            IgM)
 Provincia                                 Htal.”Cordero” San
Buenos Aires                                   Fernando


                       LAB.Referencia
                         Nacional.
                         INEVH (BM,
                        aislamiento)


   PROVINCIAS SIN                Directamente
LABORATORIOS DE RED                 INEVH
Algoritmo vigilancia epidemiológica sin
Brote
         Enf. Febril aguda con                    Epidemiologia (+)
         2 o + sintomas



                         Caso sospechoso


  Toma y envio de muestras                         Notificacion a autoridades
     (serologia)                                           sanitarias

NEG(-)          POS(+)
                                 Diagnostico Serologico Confirmatorio
                                        (2º muestra IgM)
                       NEG(-)                                 POS(+)
               descartar otra etiologia                caso dengue confirmado
Bibliografía.
      “Evaluation  of Commercially Available Anti-Dengue Virus
       Immunoglobulin M test”. Emerging Infectious Diseases. CDC,
       March,2009, Vol.15 Nº3
      “Situacion epidemiologica del Dengue en America. Desafios
       para su vigilancia y control”.Clark. 1995. Salud Publica
       Mexico, 37 supl: 5-11.
      “Plan Provincial de Contingencia para Dengue”. Pcia, de
       Buenos Aires. Ministerio de Salud. Marzo 2009
      “Algoritmo de Trabajo de la red de laboratorios de Dengue”.
       INEVH-ANLIS. Pergamino, Abril,2009.
      “Criterios Clinicos para DiagnosticarDengue en los primeros
       dias de la enfermedad”. Diaz. Martinez y Villar.
       Colombia. Revista Biomedica.2006
 “Dengue. Diagnostico por el Laboratorio”. Ospina. Asociacion
  Colombiana de Infectologia. 2004.
 “Apuntes sobre el Diagnostico de Laboratorio del Virus Dengue”.
  Guzman y Vazquez: Instituto “Pedro Kouri”. Revista Cubana de
  Medicina Tropical.2002
¡¡Gracias
por
 su
atención!!

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4.1.7 insuficiencia hepática aguda abordaje completo
BIOLOGIA BUENOS APUNTES PREUNIVERSITARIOS

Van der wekken mariela dengue

  • 1. DENGUE: Visión del Laboratorio Mariela van der Wekken Serologia - HIGA
  • 3. Principales problemas de Salud pública en todo el mundo.  80 millones infectados anualmente, 20 mil mueren. Enfermedades producidas por Flavivirus →”Infecciones ReEmergentes”  Expansión del Vector y la diseminación del Virus dengue y su forma grave: DH/SCHD.
  • 5. RNA, simple cadena 11 Kb.  3 proteínas estructurales y 7 proteínas no estructurales.  Familia Flaviviridae, Genero Flavivirus.  4 Serotipos: DEN-1, DEN-2, DEN-3 y DEN-4.  Dengue Clásico vs Dengue Hemorrágico (DH) / Síndrome de Choque por Dengue (SCHD).
  • 7. Fiebre acompañado de: Dolor de cabeza y retro ocular Perdida de apetito Nauseas, vómitos Dolores musculares y articulares Erupción de piel • DH: manifestaciones hemorrágicas. ↑permeabilidad vascular . • SCHD: Hipotensión, ↓circulación periférica (piel fría),
  • 9. Hembras de Aedes aegypti.  Persona Insecto Persona.  Mayor actividad durante el día.  Combatir Mosquitos, Larvas y Huevos.  Ciclo en condiciones óptimas; 10 días.
  • 10. Ciclo de vida del Dengue
  • 13. Periodo de Incubación: 7-10 días.  Replicación viral: máxima 2-3 días antes de los síntomas y desaparece al 5 día.  Inmunidad a un Serotipo y de “Larga duración”  2 Rtas. Serológicas: *PRIMARIA: No inmunes a Flavivirus *SECUNDARIA: Ya tuvieron contacto con Flavivirus.
  • 14. Datos a tener en cuenta
  • 15. Síntomas.  Viaje a áreas de brote autóctono.  Hepatograma alterado.  Leucopenia y Plaquetopenia.  Vacuna Fiebre amarilla.  Si tubo alguna vez Dengue.  Manifestaciones hemorrágicas.
  • 17. No existe Tratamiento especifico.  No existe Vacuna efectiva.  No dar Aspirina!!.  Aumento de Líquidos, dieta normal.  Reposo absoluto, Aislamiento con mosquiteros.  Las complicaciones DH/SCHD aparecen al 3-5 día cuando ya desapareció la fiebre.
  • 19. Huevos, y larvas pueden vivir en colecciones pequeñas de agua.  Huevos son muy resistentes.  Evitar elementos que contengan agua.  Uso de Repelentes, Mosquiteros  Uso Manga Larga, pantalones largos.
  • 22. Erradica Vector década ’60.  Reinfestacion 1986 en NE y primer epidemia en 1998 en Salta por serotipo 2.  2006-2008 casos autóctonos en Corrientes, Formosa, y Salta. Serotipos 1,2 y 3.  2009 miles de casos(+) NO y NE. Casos autóctonos Pcia. Buenos aires.  Enero-4Abril 2009 INEVH por RT-PCR solo DEN- 1.
  • 23. DIAGNOSTICO POR EL LABORATORIO DENGUE
  • 24. “La elección del Método de Diagnostico a emplear, depende de los días de evolución de los síntomas: Periodo Agudo Periodo Convalecencia 1 a 4 días 5 a 21 días Búsqueda del Virus Búsqueda de Anticuerpos Métodos Directos Métodos Serológicos
  • 25. Métodos Serológicos Se basan en la búsqueda de los anticuerpos. Luego del 5° día.
  • 26. “Los Flavivirus pueden dar reacción cruzada en las serologias haciendo mas difícil el diagnostico” Rta. Serológica en la Infección Aguda: → PRIMARIA: SIN contacto con Flavivirus Acs. Principal/ IgM. → SECUNDARIA: contacto con Flavivirus. Acs. Predomina IgG Rta. Inmune mas importante.
  • 28. A) Inhibición de la Hemaglutinación (IH) • Principio: Virus dengue aglutina GR de ganso, que se puede I(-) con la presencia de acs anti-Dengue. • Ventajas: confiable / equipo mínimo. • Desventajas: Laboriosa / 2 muestras de suero Rx. Cruzadas / mayor tiempo.
  • 29. B) Neutralización (NT) • Ventajas: * Sensible / Especifica. * Única que permite diferenciar Serotipo. • Desventajas: * 2 muestras pareadas. * tiempo. No apto para rutina * Determina Acs. Totales.
  • 30. C) ELISA de captura IgM (MAC-ELISA) • Principio: Captura de anticuerpos IgM del suero utilizando anti-IgM humanas U a la fase sólida. • Ventajas: Rápido / Sencillo. Rx. Cruzadas / Especificidad. Poco volumen de suero / Económico. Incluye los 4 serotipos: Sensibilidad.
  • 31. D) ELISA IgG • Desventajas: Sueros pareados Rx. Cruzada con otros Flavivirus. E) Test Diagnostico Rápido (RDT) F) ELISA para IgA
  • 32. Métodos Directos Se basan en la búsqueda del antígeno o virus. Antes del 5° día.
  • 33. A) Aislamiento Viral • Ventajas: Especifico Método de Referencia. A.1) Inoculación Intratoracica de Mosquitos A.2) Inoculación Células de mamíferos. A.3) Inoculación en células de Mosquitos.
  • 34. B) Detección de Ac. Nucleicos (RT-PCR) • Ventajas: Mas fácil y rápido que el Aislamiento Viral. Especifico de Serotipo. • Puede usarse DOT-BLOT con sondas radioactivas C) Detección de Ag Viral (Inmunohistoq) • Ventajas: Mas fácil y rápido que el Aislamiento Viral.
  • 35. Toma de muestra y Envío. Con la muestra adjuntar la “Ficha Epidemiológica”
  • 36. Suero Mantener a 4° por 48 hs. Mantener a -20° por mas de 72 hs Muestra 1 a -70°. Tejidos Muestra 2 a T°amb. Fijado en formol o parafina. Mantener a 4° por 48 hs. LCR Mantener a -20° por mas de 72 hs
  • 37. Algoritmo de Redes Laboratorio para dengue Contexto epidemiológico actual. Argentina. Circular Marzo 2009
  • 38. Manejo en Áreas epidémicas y No Epidémicas “Para un adecuado uso de los Recursos, se plantea ésta Metodología de trabajo”.
  • 39. Áreas de Epidemia  la Confirmación por Laboratorio de cada caso sospechoso significa “un mal uso de recursos”. cuadro + Nexo CASO DENGUE compatible Epidemiol.  Solo se estudiarán un pequeño n° de esos casos, para analizar: duración del brote, vigilar nuevos serotipos, todos los casos fatales, etc.
  • 40. Áreas no Endémicas  El trabajo del Laboratorio se centra en la vigilancia e identificación de nuevas zonas hacia donde se propaga la enfermedad. Se estudiara cada caso sospechoso.
  • 41. 3 Htal. “San Juan de LAB.Referencia Dios. La Plata. Provincial Htal. “Evita Pueblo” (Serologia ELISA Berazategui. IgM) Provincia Htal.”Cordero” San Buenos Aires Fernando LAB.Referencia Nacional. INEVH (BM, aislamiento) PROVINCIAS SIN Directamente LABORATORIOS DE RED INEVH
  • 42. Algoritmo vigilancia epidemiológica sin Brote Enf. Febril aguda con Epidemiologia (+) 2 o + sintomas Caso sospechoso Toma y envio de muestras Notificacion a autoridades (serologia) sanitarias NEG(-) POS(+) Diagnostico Serologico Confirmatorio (2º muestra IgM) NEG(-) POS(+) descartar otra etiologia caso dengue confirmado
  • 43. Bibliografía.  “Evaluation of Commercially Available Anti-Dengue Virus Immunoglobulin M test”. Emerging Infectious Diseases. CDC, March,2009, Vol.15 Nº3  “Situacion epidemiologica del Dengue en America. Desafios para su vigilancia y control”.Clark. 1995. Salud Publica Mexico, 37 supl: 5-11.  “Plan Provincial de Contingencia para Dengue”. Pcia, de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Marzo 2009  “Algoritmo de Trabajo de la red de laboratorios de Dengue”. INEVH-ANLIS. Pergamino, Abril,2009.  “Criterios Clinicos para DiagnosticarDengue en los primeros dias de la enfermedad”. Diaz. Martinez y Villar. Colombia. Revista Biomedica.2006
  • 44.  “Dengue. Diagnostico por el Laboratorio”. Ospina. Asociacion Colombiana de Infectologia. 2004.  “Apuntes sobre el Diagnostico de Laboratorio del Virus Dengue”. Guzman y Vazquez: Instituto “Pedro Kouri”. Revista Cubana de Medicina Tropical.2002